Hoechst oder DAPI zur Kernfärbung?

Der Farbstoff Hoechst 33342 ähnelt DAPI, da beide UV- sind. angeregte, geringfügige Rillenbindung und emittieren Signale proportional zum Gesamt-DNA-Gehalt. Beide werden bei 355 nm maximal angeregt und emittieren bei 460 nm. Eine UV-Lichtquelle ist erforderlich, die die Zelle schädigen kann. Dies ist jedoch nur bei Hoechst ein Risiko, da DAPI erfordert, dass die Zellen fixiert und / oder permeabilisiert werden, was mit dem Leben unvereinbar ist. DAPI ist stabiler, aber Hoechst ist heller. Beide unterliegen nach langer Belichtung einem Photobleichen.

Es gibt einen weiteren neueren DNA-Farbstoff namens DRAQ5, der alle zuvor erwähnten Probleme ausgleicht – er ist hell, ziemlich lichtstabil und kann verwendet werden Bei der Bildgebung lebender Zellen liegen die Anregungs- und Emissionswellenlängen am äußersten roten Ende des Spektrums, sodass keine UV-Strahlung benötigt wird. Ich habe eine gute Vergleichstabelle unter http://www.biostatus.com/product/draq5/live_cell_comparison_chart/ gefunden, wenn Sie interessiert sind. Ich habe keine Verbindung zu ihnen Übrigens habe ich DRAQ5 in der Vergangenheit gerade oft verwendet.

Kommentare

• Entschuldigung, aber diese Antwort ist falsch: Die meisten Mikroskope haben ein dediziertes DAPI-Kanal und sowohl DAPI als auch Hoechst können sehr gut zusammen mit FITC-ähnlichen Farbstoffen verwendet werden. Außerdem fehlt Ihnen hier der Hauptpunkt: Hoechst kann lebende Zellen färben, während DAPI ' t kann. Dies ist der Hauptgrund, warum Menschen einander vorziehen. -1 nicht dafür, sondern für die Werbung. Ich glaube nicht, dass ' dies hierher gehört.
• -1: DAPI ist absolut kompatibel mit GFP, FITC und Alexa 488 Mein schlechtes, bearbeitetes, um die Realität widerzuspiegeln.
• Verwenden Sie Dapi für feste Zellen. ' ist sehr hell, sehr spezifisch und informiert Sie, wenn Sie eine Mykoplasmenkontamination haben hat in Ihrer Kultur eine gute Haltbarkeit und ist im Allgemeinen ziemlich günstig. Wenn Sie eine Bildgebung mit lebenden Zellen durchführen müssen, verwenden Sie hoechst und wie bei @ user1850479 angegeben, gibt es mehrere Typen, die alle im Allgemeinen weniger toxisch sind. Wenn Sie ' keine blaue Kernfärbung verwenden können, funktioniert Draq gut, ' ist ein wenig dunkel I ' habe gefunden, aber es ist in einem weit roten Bereich, es ' ist relativ ungiftig, hat keine so gute Haltbarkeit wie das andere, das ich hier erwähnte, auch es ' ist wirklich teuer $$$$$$$ !!!!

DAPI und Hoechst 33342 (es gibt verschiedene Hoechst-Farbstoffe, 33342 ist einer der am häufigsten verwendeten) haben sehr ähnliche spektrale Eigenschaften. Der einzige Punkt ist, dass DAPI bei 405 nm viel besser angeregt wird als Hoechst. Einige Mikroskope und Durchflusszytometer verfügen heutzutage über 405-nm-Laser oder LEDs anstelle von UV-Quellen, sodass dies relevant werden kann.

Der Hauptunterschied und der Hauptgrund für die Wahl ist, dass Hoechst verwendet werden kann, um lebende Zellen zu färben, wenn sie die Zellmembran passieren können, während DAPI nicht kann. DAPI erfordert feste und permeabilisierte Zellen.

Kommentare

• Bedeutet dies, dass Hoechst-Flecken für den Forscher oder die Umwelt gefährlicher sind? Wenn DAPI ' t kann in lebende Zellen eindringen, aber Hoechst kann, gibt es Bedenken hinsichtlich der Mutagenität (ähnlich wie z. B. Ethidiumbromid)?
• Ja, in der Tat. Aber wir behandeln Hoechst und DAPI in unserem Labor genauso.

Mir ist klar, dass dies ein älteres Thema ist, aber ich möchte einige Missverständnisse klären:

1) DAPI wird üblicherweise als halbmembranpermanenter Farbstoff bezeichnet, da es durchdringt lebensfähige Zellmembranen sind konzentrationsabhängig. Bei niedrigeren Konzentrationen wird es größtenteils von lebensfähigen Zellen ausgeschlossen, während es bei höheren Konzentrationen lebende und tote Zellen etwa gleichermaßen färbt.

2) Hoechst gibt es sowohl in membranpermanenten als auch in unbeständigen Varianten. Stellen Sie sicher, dass Sie die richtige für Ihre Anwendung bestellen!

3) Es ist nicht unbedingt richtig, dass Hoechst für lebensfähige Zellen bevorzugt wird. Hoechst diffundiert beispielsweise sehr langsam durch dickes Gewebe. Daher färbt DAPI für In-vivo-Bildgebungsanwendungen (oder in Gewebeschnitten) lebensfähige Zellen häufig viel besser als das (viel schwerere) 33342, da es besser durch Gewebe diffundieren kann. Für isolierte Zellen kann Hoechst 33342 jedoch lebensfähige Kerne viel schneller färben (Sekunden gegenüber Minuten für DAPI).