핵 염색에 Hoechst와 DAPI를 사용하는 것이 가장 좋은시기는 언제입니까? 그들은 종이에서 매우 비슷해 보입니다. 하나가 분명하게 바람직한 상황이 있습니까?
답변
Hoechst 33342 염료는 둘 다 UV라는 점에서 DAPI와 유사합니다. 여기, 작은 그루브 결합, 총 DNA 함량에 비례하는 신호를 방출합니다. 둘 다 약 355 nm에서 최대로 여기되고 약 460 nm를 방출합니다. UV 광원이 필요하므로 세포에 손상을 줄 수 있습니다. 그러나 DAPI는 세포를 고정 및 / 또는 투과 화해야하므로 생명과 양립 할 수없는 Hoechst의 위험 일뿐입니다. DAPI는 더 안정적이지만 Hoechst는 더 밝습니다. 둘 다 장시간 노출 후 광표백됩니다.
앞서 언급 한 모든 문제를 보완하는 DRAQ5라는 또 다른 새로운 DNA 염료가 있습니다. 밝고 광 안정성이 뛰어나며 사용할 수 있습니다. 라이브 셀 이미징에서 여기 및 방출 파장은 스펙트럼의 먼 빨간색 끝 부분에 있으므로 UV가 필요하지 않습니다. 관심이 있으시다면 http://www.biostatus.com/product/draq5/live_cell_comparison_chart/ 에서 좋은 비교 차트를 찾았습니다. 저는 그들과 관련이 없습니다. 예전에 DRAQ5를 많이 사용했습니다.
댓글
- 죄송하지만이 대답은 잘못되었습니다. 대부분의 현미경에는 DAPI 채널과 DAPI 및 Hoechst는 FITC와 유사한 염료와 함께 매우 잘 사용할 수 있습니다. 또한 여기서 요점을 놓치고 있습니다. Hoechst는 살아있는 세포를 염색 할 수있는 반면 DAPI는 ' t를 염색 할 수 있습니다. 이것이 사람들이 서로를 선택하는 주된 이유입니다. -1 그게 아니라 광고를 위해서. 저는 ' 이것이 여기에 속한다고 생각하지 않습니다.
- -1 : DAPI는 GFP, FITC 및 Alexa 488과 절대적으로 호환됩니다. \
- 현실을 반영하도록 편집되었습니다.
- 고정 된 세포에 dapi를 사용하면 ' 매우 밝고 매우 구체적이어서 마이코 플라스마 오염 여부를 알려줍니다. 당신의 문화에서 유통 기한이 좋고 일반적으로 상당히 저렴합니다. 라이브 셀 이미징을 수행해야하는 경우 hoechst를 사용하고 @ user1850479가 여러 유형이 있다고 언급했듯이 일반적으로 모두 독성이 적습니다. 파란색 핵 염색을 ' 사용할 수 없다면 Draq이 잘 작동하는 것입니다. ' 조금 어둡습니다. ' 찾았지만 먼 적색 범위에 있으며 ' 상대적으로 무독성이며 여기에서 언급 한 다른 것만 큼 유통 기한이 좋지 않습니다. '는 정말 비싸 $$$$$$$ !!!!
답변
DAPI 및 Hoechst 33342 (다른 Hoechst 염료가 있으며 33342가 가장 일반적으로 사용되는 염료 중 하나임)는 스펙트럼 특성이 매우 유사합니다. 유일한 요점은 DAPI가 Hoechst보다 405nm에서 훨씬 더 흥분된다는 것입니다. 오늘날 일부 현미경 및 유세포 분석기에는 UV 소스 대신 405nm 레이저 또는 LED가 있으므로 관련성이있을 수 있습니다.
주요 차이점 둘 중 하나를 선택하는 주된 이유는 Hoechst가 세포막을 통과 할 수 있기 때문에 살아있는 세포를 염색하는 데 사용할 수있는 반면 DAPI는 불가능합니다. DAPI에는 고정 및 투과 세포가 필요합니다.
코멘트
- 이것은 Hoechst 얼룩이 연구원이나 환경에 더 위험하다는 것을 의미합니까? DAPI가 ' t 살아있는 세포에 들어가지만 Hoechst는 할 수 있습니다. 돌연변이 유발성에 대한 우려가 있습니까 (예 : ethidium bromide와 유사)?
- 예, 그렇습니다.하지만 Hoechst와 DAPI를 실험실에서 동일한 방식으로 취급합니다.
답변
이 주제가 오래된 주제라는 것을 알고 있지만 몇 가지 오해를 명확히하고 싶습니다.
1) DAPI는 투과성 때문에 일반적으로 반막-영구 염료라고합니다. 생존 가능한 세포막은 농도에 따라 다릅니다. 낮은 농도에서는 대부분 생존 가능한 세포에서 제외되는 반면 높은 농도에서는 살아있는 세포와 죽은 세포를 거의 동일하게 염색합니다.
2) Hoechst는 멤브레인 영구 및 비 영구 품종으로 제공됩니다. 응용 프로그램에 맞는 올바른 것을 주문하십시오!
3) Hoechst가 생존 가능한 세포에 선호된다는 것은 반드시 사실은 아닙니다. Hoechst는 예를 들어 두꺼운 조직을 통한 매우 느린 확산을 가지고 있으므로 생체 내 이미징 응용 프로그램 (또는 조직 섹션)의 경우 DAPI는 조직을 통해 더 잘 확산 될 수 있기 때문에 종종 (훨씬 더 무거운) 33342보다 생존 가능한 세포를 훨씬 더 잘 염색합니다. 그러나 분리 된 세포의 경우 Hoechst 33342는 생존 가능한 핵을 훨씬 더 빠르게 염색 할 수 있습니다 (DAPI의 경우 몇 초 대 몇 분).