Hoechst ou DAPI pour la coloration nucléaire?

Le colorant Hoechst 33342 est similaire au DAPI en ce que les deux sont UV- excité, se liant à un sillon mineur et émet des signaux proportionnels à la teneur totale en ADN. Les deux sont excités au maximum autour de 355 nm et émettent autour de 460 nm. Une source de lumière UV est nécessaire, ce qui peut endommager la cellule. Cependant, ce nest quun risque avec Hoechst, car le DAPI nécessite que les cellules soient fixées et / ou perméabilisées, ce qui est incompatible avec la vie. DAPI est plus stable, mais Hoechst est plus brillant. Les deux sont sujets à un blanchiment photo après une longue exposition.

Il existe un autre colorant ADN plus récent appelé DRAQ5 qui compense tous les problèmes que jai mentionnés précédemment – il est brillant, assez photostable, peut être utilisé dans limagerie de cellules vivantes, et ses longueurs donde dexcitation et démission se situent à lextrémité rouge du spectre, ce qui signifie quaucun UV nest nécessaire. Jai trouvé un bon tableau de comparaison à http://www.biostatus.com/product/draq5/live_cell_comparison_chart/ si vous « êtes intéressé. Je nai aucun lien avec eux, par le façon, je « ai juste utilisé beaucoup DRAQ5 dans le passé.

Commentaires

• Désolé, mais cette réponse est fausse: la plupart des microscopes ont un Le canal DAPI et DAPI et Hoechst peuvent très bien être utilisés avec des colorants de type FITC. De plus, vous manquez le point principal ici: Hoechst peut colorer les cellules vivantes, tandis que DAPI peut ' t. Cest la principale raison pour laquelle les gens se choisissent les uns sur les autres. -1 pas pour ça, mais pour la publicité. Je ' ne pense pas que cela appartient ici.
• -1: DAPI est absolument compatible avec GFP, FITC et Alexa 488. \
• mon mauvais, édité pour refléter la réalité.
• Utilisez dapi pour les cellules fixes, il ' est très brillant, très spécifique, vous permettra de savoir si vous avez une contamination par mycoplasme dans votre culture, a une bonne durée de conservation et est généralement assez bon marché. Si vous devez faire de limagerie de cellules vivantes, utilisez hoechst et comme @ user1850479 a déclaré quil en existe plusieurs types, ils sont tous généralement moins toxiques. Si vous ne pouvez ' pas utiliser une staine nucléaire bleue Draq fonctionne bien, ' est un peu faible I ' jai trouvé mais il est dans la gamme rouge lointaine, il ' est relativement non / toxique, na pas une durée de conservation aussi bonne que lautre que jai mentionné ici, aussi il ' est vraiment cher $$$$$$$ !!!!

DAPI et Hoechst 33342 (il existe différents colorants Hoechst, 33342 est lun des plus couramment utilisés) ont des caractéristiques spectrales très similaires. Le seul point est que DAPI est bien mieux excité à 405 nm que Hoechst. Certains microscopes et cytomètres en flux ont de nos jours des lasers ou des LED à 405 nm au lieu de sources UV, donc cela peut devenir pertinent.

La principale différence et la principale raison de choisir lun ou lautre est que Hoechst peut être utilisé pour colorer les cellules vivantes car il peut passer la membrane cellulaire, alors que DAPI ne peut » t. Le DAPI nécessite des cellules fixes et perméabilisées.

Commentaires

• Cela implique-t-il que les taches Hoechst sont plus dangereuses pour le chercheur ou pour lenvironnement? Si DAPI peut ' t entrer dans des cellules vivantes mais Hoechst peut, y a-t-il des inquiétudes concernant la mutagénicité (comme par exemple le bromure déthidium)?
• Oui, en effet. Mais nous traitons Hoechst et DAPI de la même manière dans notre laboratoire.

Je me rends compte que cest un sujet plus ancien, mais jaimerais clarifier certaines idées fausses:

1) DAPI est généralement appelé un colorant semi-permanent à membrane car sa pénétration à travers les membranes cellulaires viables dépendent de la concentration. À des concentrations inférieures, il est principalement exclu des cellules viables, tandis quà des concentrations plus élevées, il colore les cellules vivantes et mortes à peu près également.

2) Hoechst est disponible en variétés à membrane permanente et impermanente. Assurez-vous de commander le bon pour votre application!

3) Ce nest pas forcément vrai que Hoechst est préféré pour les cellules viables. Hoechst a une diffusion très lente à travers les tissus épais par exemple, donc pour les applications dimagerie in vivo (ou dans les coupes de tissus), DAPI colore souvent les cellules viables beaucoup mieux que le 33342 (beaucoup plus lourd) car il est mieux capable de diffuser à travers les tissus. Cependant, pour les cellules isolées, Hoechst 33342 peut colorer beaucoup plus rapidement les noyaux viables (secondes contre minutes pour DAPI).