Hoechst vagy DAPI nukleáris festésre?

A Hoechst 33342 festék hasonló a DAPI-hoz, mivel mindkettő UV- gerjesztett, kisebb horony-kötő és a teljes DNS-tartalommal arányos jeleket bocsát ki. Mindkettő maximálisan gerjesztett 355 nm körül, és 460 nm körül sugároz. UV-fényforrásra van szükség, amely károsíthatja a sejtet. Ez azonban csak a Hoechst esetében jelent kockázatot, mivel a DAPI megköveteli a sejtek rögzítését és / vagy permeabilitását, ami összeegyeztethetetlen az élettel. A DAPI stabilabb, de a Hoechst fényesebb. Hosszú expozíció után mindkettő fotófehérítésnek van kitéve.

Van egy másik újabb DRAQ5 nevű DNS-festék, amely pótolja az összes korábban említett problémámat – világos, elég fotóstabil, használható az élő sejtek képalkotásakor gerjesztése és emissziós hullámhossza a spektrum távoli vörös végén van, vagyis nincs szükség UV-ra. Találtam egy jó összehasonlító táblázatot a http://www.biostatus.com/product/draq5/live_cell_comparison_chart/ címen, ha érdekel. Nincs kapcsolatom velük, a módon, a múltban nagyon sokat használtam a DRAQ5-öt.

Megjegyzések

• Sajnáljuk, de ez a válasz téves: A legtöbb mikroszkóp dedikált A DAPI csatorna, mind a DAPI, mind a Hoechst nagyon jól használható FITC-szerű festékekkel együtt. Itt hiányzik a fő pont: Hoechst festheti az élő sejteket, míg a DAPI ' t. Ez az oka annak, hogy az emberek miért választanak egyet. -1 nem azért, hanem a hirdetésért. Nem hiszem, hogy ' ez ide tartozik.
• -1: A DAPI teljesen kompatibilis a GFP-vel, a FITC-vel és az Alexa 488-tal. \
• rossz, a valóság tükrében szerkesztve.
• Használjon dapi-t rögzített cellákhoz, ez ' nagyon világos, nagyon specifikus, és tájékoztatja Önt arról, hogy mikoplazma szennyezett-e kultúrájában jó eltarthatósággal rendelkezik, és általában meglehetősen olcsó. Ha élő sejtes képalkotást kell végeznie, használja a hoechst-t, és hasonlóan @ user1850479-hez, több típus létezik, ezek általában kevésbé mérgezőek. Ha nem tudja ' használni a kék nukleáris staine Draq-t, az jól működik, akkor ' egy kis halvány I ' találtuk, de messze vörös tartományban van, ' viszonylag nem / mérgező, nincs olyan jó eltarthatósága, mint a másiknak, amelyet itt említettem, szintén ' nagyon drága $$$$$$$ !!!!

A DAPI és a Hoechst 33342 (különböző Hoechst színezékek vannak, a 33342 az egyik leggyakrabban használt) spektrális jellemzői nagyon hasonlóak. Az egyetlen lényeg, hogy a DAPI sokkal jobban gerjesztett 405 nm-en, mint Hoechst. Egyes mikroszkópokban és áramlási citométerekben manapság 405 nm-es lézerek vagy LED-ek vannak UV-források helyett, így ez relevánssá válhat.

A fő különbség és a választás egyik fő oka az, hogy a Hoechst felhasználható az élő sejtek festésére, mivel áthaladhat a sejtmembránon, míg a DAPI nem képes. A DAPI-nak fix és permeabilizált sejtekre van szüksége.

Megjegyzések

• Ez azt jelenti, hogy a Hoechst-foltok veszélyesebbek a kutatóra vagy a környezetre? Ha a DAPI ' nem képes belépni az élő sejtekbe, de Hoechst képes, vannak-e aggályai a mutagenitással kapcsolatban (hasonlóan például az etidium-bromidhoz)?
• Igen, valóban. De a Hoechst és a DAPI-t laboratóriumunkban ugyanúgy kezeljük.

Rájöttem, hogy ez egy régebbi téma, de szeretnék tisztázni néhány tévhitet:

1) A DAPI-t általában félmembrán-tartós festéknek nevezik, mivel áthatol rajta az életképes sejtmembránok koncentrációtól függenek. Alacsonyabb koncentrációknál többnyire kizárják az életképes sejtekből, míg nagyobb koncentrációkban az élő és elhalt sejteket kb.

2) A Hoechst mind a membrán állandó, mind nem állandó fajtáiban létezik. Győződjön meg róla, hogy a megfelelőt rendelte-e az alkalmazásához!

3) Nem feltétlenül igaz, hogy az életképes sejtek esetében a Hoechst előnyben részesítése. A Hoechst nagyon lassú diffúzióval rendelkezik például vastag szöveteken keresztül, így in vivo képalkotó alkalmazásokhoz (vagy szöveti metszetekhez) a DAPI gyakran sokkal jobban foltozza az életképes sejteket, mint a (sokkal nehezebb) 33342, mert jobban képes diffundálni a szöveteken keresztül. Az izolált sejtek esetében azonban a Hoechst 33342 sokkal gyorsabban képes festeni az életképes magokat (másodpercek és percek DAPI esetén).